基于层次分析法（AHP）的保健食品原料评价体系构建及分析

目的建立保健食品原料评价体系(Functional Food Crude Materials Evaluation System,FUFMES),为保健食品原料目录排名提供科学依据与技术保障。方法首先,利用文献调研和多轮专家访谈方法筛选FUFMES的指标并确定其层级关系;第二,使用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)计算指标权重,具体方法是依据专家打分构建判断矩阵,利用R语言进行一致性检验与最大特征根检验,得出各级指标权重;第三,使用极值法计算原料的单个指标值;第四,利用线性加权综合法得到每种原料的评价指数并据此进行排名;最后,将获得的分析结果与专家评价结果进行比较。结果 FUFMES包括6个一级指标、39个二级指标、11个三级指标。利用FUFMES对9种保健食品原料进行评价,获得的评价指数依次是:西洋参(0.49)、人参(0.48)、银杏叶(0.21)、灵芝孢子粉(0.08)、鱼油(0.06)、螺旋藻(0.03)、辅酶Q10(0.02)、褪黑素(0.01)、大蒜油(-0.03)。基于该评价指数的排名结果与专家评价结果显示了较高一致性。结论构建了科学、完整的FUFMES,FUFMES将成为保健食品原料目录评价与排名的有力工具,为推进保健食品原料备案制提供科学依据与技术保障。     

赤芝FPS基因酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

目的筛选赤芝三萜合成途径中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游调控转录因子。方法首先克隆了FPS基因启动子,并连接至pAbAi质粒构建诱饵载体pAbAi-FPS。将pAbAi-FPS转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌。采用SMART技术构建赤芝酵母单杂交cDNA文库,再将纯化的双链cDNA、pGADT7-Rec共转化诱饵菌株,筛选FPS上游的转录调控因子。结果构建了含pAbAi-FPS的诱饵载体并筛选出诱饵菌株,构建了cDNA文库并转化诱饵菌株,筛选出阳性克隆37个,得到作用FPS基因上游的转录调控因子18个,包括转录因子3个、核糖体蛋白5个及其他家族蛋白10个。结论筛选出转录因子GlSNF2、GlMHR和GlZn2Cys6为调控FPS表达的候选基因,为深入研究FPS基因的表达调控机制奠定了研究基础。     

Effect of the heme oxygenase gene on mycelial growth and polysaccharide synthesis in Ganoderma lucidum

The heme oxygenase gene has antioxidant and cytoprotective effects in organisms, but no related research has been conducted in Ganoderma lucidum. For the first time, we cloned the HMX1 gene in G. lucidum. The CDS is 1092 bp in length and encodes 363 amino acids. The HMX1 protein was prokaryotically expressed and purified, and the enzyme activity of the purified protein was measured. The value of K_m was 0.699 μM, and V_m was 81.9 nmol BV h⁻¹ nmol⁻¹ protein. By constructing the silencing vector pAN7-dual-HMX1i, the transformants HMX1i1 and HMX1i2 were obtained. Compared with the wild-type (WT), the average growth rate of HMX1i1 and HMX1i2 decreased by 31% and 23%, respectively, and the mycelium biomass decreased by 53% and 48%, respectively. Compared with the WT, the extracellular polysaccharide content of HMX1i1 and HMX1i2 increased by 59% and 51%, and the intracellular polysaccharide content increased by 24% and 22%, respectively. These results indicate that the HMX1 gene affects mycelial growth and polysaccharide synthesis in G. lucidum.     

灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠氧化应激的影响

目的研究灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病大鼠氧化应激的影响。方法 采用斯泼累格·多雷（SD）大鼠高脂饮食4周后,腹腔注射小剂量链脲佐菌素30 mg.kg-1造模。成模后将大鼠随机分为模型对照组、灵芝多糖组（给予灵芝多糖600 mg.kg-1）、二甲双胍组（给予二甲双胍600 mg.kg-1）及联合用药组（给予灵芝多糖300 mg.kg-1＋二甲双胍300 mg.kg-1）,另设正常对照组。给药治疗12周末测量大鼠空腹血糖;测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）水平。结果用药组空腹血糖水平均低于模型对照组（P<0.01）,其中联合用药组血糖显著低于单独用药组（P<0.01）。与模型对照组比较,用药组血清TC、TG水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,与单独用药组比较,联合用药组血清TC、TG水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组比较,用药组血清SOD水平明显升高（P<0.01）;与单独用药组比较,联合用药组血清SOD水平明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清MDA水平明显降低（P<0.01）,联合用药组血清MDA较单独用药组明显降低（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清CAT、GSH-Px水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,联合用药组血清CAT、GSH-Px水平较单独用药组明显升高（P<0.05）。结论 灵芝多糖、二甲双胍联合用药能够有效对抗2型糖尿病大鼠体内氧化应激作用,效果优于单独用药,其机制可能与增强体内SOD、CAT、GSH-Px水平及调节血脂障碍有关。     

贞芪扶正冲剂对颌面部鳞癌化疗患者生存质量的影响

目的:探讨贞芪扶正冲剂对颌面部鳞癌化疗患者生存质量的影响。方法:将272例颌面部鳞癌患者随机分为治疗组136例(口服贞芪扶正冲剂+化疗)与对照组136例(单纯化疗)。两组均采用平阳霉素+顺铂+甲氨蝶呤化疗方案。至少完成两个疗程的化疗,每疗程化疗前后进行生存质量对比评价。结果:治疗组与对照组比较,KarnofskyPS(KPS)评分改善者分别为80、26例次,第二疗程为87、30例次。两组KPS评分分布上的变化差异有统计学意义。结论:中药贞芪扶正冲剂为纯天然中草药制剂,辅助化疗可以改善患者的KPS评分值,增加患者的体重,稳定患者的白细胞数,减轻患者化疗并发症的发生率,从而提高患者的生存质量。     

失血性休克复苏时心肌损伤和一氧化氮的变化及灵芝多糖的干预作用

目的 :探讨失血性休克和复苏再灌注过程中心肌损伤和一氧化氮 (NO)浓度的变化及灵芝多糖的干预作用。方法 :复制家兔失血性休克再灌注模型 ,随机分成假手术组、生理盐水再灌注组和质量分数为 1%的灵芝多糖再灌注组 ;观察 3组动物平均动脉血压 (MAP)、心功能、血浆 NO浓度及心肌 NO含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的变化。结果 :两个再灌注组动物在失血性休克 4 0 m in时左心室舒张末压 (L VEDP)比休克前及假手术组略有升高 ,但差异不显著 (P均 >0 .0 5 ) ,左心室内压最大变化速率 (± dp/dt max)则明显降低 (P均 <0 .0 5 ) ,血浆 NO浓度则显著升高 (P均 <0 .0 5 )。生理盐水再灌注组动物再灌注 4 0 min时 ,心功能较休克 4 0 m in时进一步降低 (P<0 .0 5 ) ,血浆 NO浓度进一步升高 ,心肌 NOS活性和 NO含量明显高于假手术组 (P均 <0 .0 5 )。灵芝多糖组再灌注 4 0 min时较生理盐水再灌注组、心功能明显改善 ,血浆 NO浓度、心肌 NO含量和心肌 NOS活性均明显降低 (P均 <0 .0 5 )。结论 :失血性休克再灌注过程中心肌 NOS活性、血浆 NO浓度、心肌NO含量均升高 ,而心功能降低 ,提示 NO在失血性休克再灌注心肌损伤中起重要作用 ;而灵芝多糖可通过抑制 NOS活性、降低 NO浓度对失血性休克再灌注心肌损伤起保护作用。     

灵芝孢子对原发性肝癌术后肝功能影响的研究

目的评估灵芝孢子对原发性肝癌术后肝功能的影响。方法80例原发性肝癌切除术后患者随机分为对照组（常规护肝治疗）和治疗组（对照组基础上加灵芝孢子治疗）,各40例。术后1d、3d、7d动态监测肝功能指标（ALT、AST、TBIL、ALB、PT）变化,比较灵芝孢子治疗对原发性肝癌术后肝功能的影响。结果术后第1天,治疗组和对照组均出现较明显的肝功能损害。经1周治疗后,治疗组较对照组肝功能明显改善（P=0．032）,无一例出现肝功能不全,而对照组2例出现肝功能不全。两组术后并发症和药物不良反应无明显差异（P分别为0．453、0．874）。结论灵芝孢子可以较好地改善原发性肝癌患者术后肝功能的损害,改善患者的预后。     

灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法用出生1~3 d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3~4 d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg·L-1)。MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化。结果与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P<0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg·L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤。流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P<0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P<0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P<0.01)。结论GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关。     

星点设计-效应面法优化鹿角灵芝微乳超声提取工艺

目的 探讨以微乳超声法同时提取鹿角灵芝中灵芝酸和灵芝多糖的最佳条件。方法 采用星点设计-效应面法,以物料溶剂比(X₁)、超声提取时间(X₂)和超声功率(X₃)作为考察因素,以灵芝酸A、灵芝酸C₂、灵芝多糖含量和提取物得率为考察指标,并对考察因素和考察指标总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合,以效应面优选最佳的微乳超声提取工艺,并做验证试验。结果 微乳超声提取鹿角灵芝的最佳条件为物料溶剂比1∶18、超声提取时间59 min、超声功率513 W,此条件下灵芝酸A、灵芝酸C₂、灵芝多糖含量和提取物得率分别为0.647 8,0.108 5,11.20 mg·g^-1和34.28%。结论 微乳超声可同时提取鹿角灵芝中脂溶性和水溶性成分,并且节能、省时、操作简便,为工业化提取鹿角灵芝提供了新途径。     

灵芝多糖对癫痫大鼠脑中谷氨酸转运体的影响

目的：观察和探讨灵芝多糖干预后戊四氮（ PTZ）致痫大鼠皮质和海马区兴奋性谷氨酸转运体（EAAT）GLAST（EAAT1）、GLT1（EAAT2）、EAAC1（EAAT3）的变化,进一步研究癫痫的发病机制及灵芝多糖的作用机制。方法 SD 大鼠32只,随机分为正常对照组、癫痫模型组、灵芝多糖组和卡马西平组,每组8只。癫痫组、灵芝多糖组和卡马西平组采用 PTZ 腹腔注射制作慢性癫痫点燃模型。实验结束后断头迅速取脑,采用免疫组化法检测皮质和海马区各指标的变化。结果癫痫模型组大鼠脑中 GLAST、GLT1、EAAC1的表达较正常对照组降低：皮质（31.87±4.76）、（48.00±5.34）,（42.87±4.01）、（52.12±3.75）,（40.25±2.81）、（46.87±3.04）;海马：（29.87±4.32）、（44.51±4.81）,（36.50±3.02）、（47.00±3.20）,（35.62±3.42）、（42.12±3.56）;灵芝多糖和卡马西平组大鼠脑中 GLAST1、GLT1、EAAC1的表达较癫痫模型组升高：皮质（40.50±4.47）、（31.87±4.76）,（48.87±3.48）、（42.87±4.01）,（43.87±2.53）、（40.25±2.81）;海马：（37.75±3.61）、（29.87±4.32）,（41.25±2.60）、（36.50±3.02）,（39.50±2.61）、（35.62±3.42）。灵芝多糖组和卡马西平组之间 GLAST1、GLT1、EAAC1三者的表达无统计学意义。结论灵芝多糖能够升高癫痫大鼠脑中 GLAST、GLT1、EAAC1的表达,加速了兴奋性氨基酸 Glu（谷氨酸）的清除。降低神经元兴奋性、减少神经系统损伤而抑制癫痫的发作。